植物内质网提取试剂盒(酶法)

产品货号：

HR8196

中文名称：

植物内质网提取试剂盒(酶法)

英文名称：

Plant endoplasmic reticulum Extraction Kit

产品规格：

50T|100T

发货周期：

1～3天

产品价格：

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简要说明：

本试剂盒可用于各种植物细胞和软组织样本的内质网的提取。适用于各种类型内质网的提取。本试剂盒采用酶法提取，酶法提取制备的内质网，回收率提高，纯度高，保持天然活性，但是耗时较长。非酶法的提取试剂盒提取过程简单方便，速度快，可在1小时内完成，而且绝少交叉污染，但是回收率相比酶法较低。

如果需要更加快捷的提取试剂盒，可以选择非酶法植物内质网提取试剂盒，对提取速度没有要求的话，可以选择酶法提取试剂盒。本试剂盒需要使用高速离心，没有高速离心的条件时，可以选择低速离心法内质网提取试剂盒。

背景资料：

内质网存在于除哺乳动物成熟的红细胞外的各种真核细胞中。内质网为由生物膜构成的互相通连的片层隙状或小管状系统，膜片间的隙状空间称为池，通常与细胞外隙和细胞浆基质之间不直接相通。这种细胞内的膜性管道系统一方面构成细胞内物质运输的通路，另方面为细胞内各种各样的酶反应提供广阔的反应面积。内质网的功能与蛋白质的合成、糖类和脂类的合成、解毒、同化作用有关，并且还具有运输蛋白质的功能。

产品组成：

组分	50T	100T
植物内质网提取液A	25mL	50mL
植物内质网提取液B	50mL	100mL
植物内质网提取液C	25mL	50mL

保存：提取液A置于-20℃，提取液B、C置于2～8℃，有效期一年。

保存事项：
提取液A短期2～8℃保存，一个月以上长期不用-20℃保存，避免反复冻融。可以根据需要分装保存。
有效期为试剂盒未拆封前按要求条件保存的有效期，试剂拆封后请尽快使用完。

用户自备：

仪器准备：离心机、振荡器、Dounce匀浆器、涡旋混匀器、移液器、冰箱、冰盒。
试剂准备：1×PBS缓冲液(pH7.4,10mM)。
耗材准备：离心管、吸头、细胞筛（100μm）、一次性手套。

特别提示：

正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。
禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

注意事项：

旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
如果需要回收所有光面内质网小泡，最后一个离心步骤的离心力需要提高到100000g力。

使用方法：

取新鲜植物样本叶片，洗净擦干后去除叶梗和粗脉。500mg～1g植物组织样本用手术剪刀尽可能剪碎。
也可用刀片将叶片样本切成小块。
用PBS或生理盐水洗涤样品一次。1000×g离心10分钟。弃上清，收集沉淀。
加入500μL提取液A，充分混匀。
- 培养细胞1000×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞后用PBS洗涤2次，然后直接加入提取液A重悬。
- 大约每300μL细胞压积中加入1mL提取液A。
在37℃或室温条件下在振荡器上轻微振荡12～72小时。
- 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
- 没有振荡条件也可以不振荡，中间每隔几小时用移液器吹打混匀即可。
- 根据下游内质网的应用选择合适的温度，最佳温度为55℃。
- 不同类型的植物样本需要处理的时间差异较大。拟南芥较易处理，鲜嫩叶片较易处理，年龄小的样本处理时间短。拟南芥嫩叶最短4小时即可。
- 部分细胞壁较厚的植物类型可能需要处理更长时间。可以延长至72小时以上处理以提高内质网得率。
在1000×g离心10分钟，去上清，收集沉淀。
加入500μL提取液B后用匀浆机充分匀浆或者加提取液B后用Dounce匀浆器充分匀浆。
- 培养细胞直接收集细胞后用Dounce匀浆器匀浆即可，匀浆后加提取液混匀后直接进行后续操作。
- 没有Dounce匀浆器时，在上步沉淀中加入1mL试剂B充分混匀，置振荡器上轻微振荡30～45分钟。
在700×g离心3分钟。弃沉淀，取上清。
将上清11000×g离心20分钟。弃沉淀，取上清。
将上清吸入另一干净离心管。
在4℃，30000×g～50000×g力条件下离心45分钟。
如果条件允许，可将离心力加大到100000×g，有利于提高光面内质网小泡回收率。
在沉淀中加入400μL冷的试剂C，混匀。
在4℃，30000×g～50000×g力条件下离心45分钟。
如果条件允许，可将离心力加大到100000×g，有利于提高光面内质网小泡回收率。
弃上清，沉淀即为内质网。
用合适的缓冲液重悬内质网，置冰箱备用或直接用于下游实验。

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